1、加入50ul標準品（Standards）、血清標本于相應反應板孔中。

　　

　　2、每孔加入100ul酶聯物（Conjugate），輕輕混勻30秒（重要），室溫60分鐘。

　　

　　3、洗板：甩盡板內液體，用蒸餾水或者洗滌液（普通洗滌液，自配）洗滌反應板，并去除水滴（在厚疊吸水紙上拍干）；這樣反復洗滌5次。

　　

　　4、每孔加入100ul顯色液，輕輕混勻10秒，室溫20分鐘。

　　

　　5、每孔加入50ul終止液（StopSolution）。輕輕混勻30秒；30分鐘內在450nm處讀OD值。

　　

　　猴ELISA試劑盒的操作注意事項：

　　

　　1、試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

　　

　　2、濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

　　

　　3、各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

　　

　　4、請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

　　

　　5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　

　　6、底物請避光保存。

　　

　　7、嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。